Aydın ilinde fermente sucuk satış yerlerinden farklı zamanlarda alınan 100 sucuk örneği kullanıldı. Sucuklar steril şartlarda laboratuara getirildi ve getirildiği gün ekimleri yapıldı.
Örneklerin bakteriyolojik analizler için hazırlanması: Aseptik koşullarda, 10 g sucuk örneği steril plastik torbalara alındı ve üzerine 90 ml % 0.1'lik peptonlu su ilave edilerek 3 dakika süreyle Stomacher'de homojenize edildi ve 10-1'lik seyreltisi hazırlandı. Sonra ¼ Ringer çözeltisi kullanılarak diğer desimal seyreltileri hazırlandı 11.
Toplam aerob mezofil bakteri sayısı: Plate Count Agar (Oxoid CM 325) besi yeri kullanıldı. Hazırlanan dilusyonlardan plak dökme yöntemiyle ekimler yapıldı. Petri kutuları 30±1 ºC'de 3 gün inkübe edildi. İnkubasyon sonunda 30-300 arasında koloni içeren kültürler değerlendirmeye alındı 11.
Koliform grubu bakterilerin sayımı: Violet Red Bile Agar (Difco B12) besi yeri kullanıldı. 30±1 ºC'de 24 saat inkübe edilerek oluşan tipik koloniler sayıldı 11.
Escherichia coli izolasyonu : Etkenin izolasyonu için Tryptone Bile X–Glucuronide Medium (TBX) (Oxoid CM 945) besiyeri kullanıldı. Hazırlanan 10-1 seyreltiden ekim yapılarak 30 ºC'de 4 saat, daha sonra 44 ºC'de 18 saat inkubasyona bırakıldı 12.
Maya ve küflerin sayımı: Potato Dextrose Agar (Difco B 13) besi yeri kullanıldı. Hazırlanan seyreltilerden plak dökme yöntemiyle ekimler yapıldı. Petriler 22±1 oC'de 5 gün inkübe edildi 11.
Stafilokok-mikrokokların sayımı: Baird Parker (BP) agar (Oxoid, CM 275) besi yeri kullanıldı. Hazırlanan seyreltilerden petrilere ekim yapılarak, 37±1 ºC'de iki gün inkübe edildikten sonra değerlendirildi 11.
Koagulaz pozitif Staphylococcus aureus'un saptanması: Koagulaz stafilokok sayımı için Baird Parker (BP) agar (Oxoid, CM 275) besi yeri kullanılmıştır. Ekim sonrası petri plakları 36±1 ºC'de 30 saat inkübasyona bırakıldı. İnkübasyondan sonra petrilerde üreyen etrafı açık renkli bir alanla çevrili siyah renkli tipik görüntüye sahip koloniler ile atipik kolonilerden 5 tanesi seçilerek koagulaz testi uygulandı. Koagulaz test sonucu pozitif olan kolonilerin sayısı şüpheli kolonilerin sayısıyla çarpılıp, 5'e bölünerek koagulaz pozitif S. aureus'un sayısı belirlendi 11.
Salmonella'ların izolasyonu: Ön zenginleştirme aşamasında, 25 g numune 225 ml tamponlanmış peptonlu suda (TPS) homojenize edilerek 37 ºC'de 24 saat inkübe edildi. Selektif zenginleştirme aşamasında ise Rappaport Vassiliadis (RV) broth'a (Oxoid, CM 669) 0.1 ml TPS'den geçilerek 42 ºC'de 24-48 saat inkübe edildi. RV broth'dan Brilliant Green Agar (BG agar) (Oxoid, CM 263)'a ekim yapıldı ve 37 ºC'de 20-24 saat inkübe edildi. BG agarda etrafı parlak kırmızı zon ile çevrili pembe-kırmızı renkli koloniler, Salmonella şüpheli olarak değerlendirildi. Salmonella şüpheli kolonilerden Triple Sugar Iron Agar (TSIA) (Oxoid, CM 277) ve Lysine Iron Agar (LIA) (Oxoid, CM 381) biyokimyasal test besiyerlerine ekimler yapılarak, 37 ºC'de 24 saat inkübasyona bırakıldı. İnkubasyon sonunda, TSIA ve LIA'daki renk değişimine göre pozitiflik değerlendirilmesi yapıldı. Salmonella şüpheli kolonilerin serolojik identifikasyonu, Salmonella antiserumu (Salmonella O Poly A-1 ve Vi-Difco 2264-47-2) ile test edilerek, aglütinasyon oluşumunun pozitif olup olmamasına göre değerlendirildi 11.
Listeria izolasyonu: Her sucuk numunesinden 25 g miktarında tartılarak steril plastik torbaya konuldu ve üzerine 225 ml Listeria Enrichment Broth (LEB, Oxoid) ilave edildi. Örnekler stomacher (Interscience, 78860 St Nom-France)'de 2 dakika homojenize edildikten sonra 30 ºC'de 24 saat inkubasyona bırakıldı (ön zenginleştirme). İnkubasyon süresinin sonunda, 0.1 ml kültür alınarak, 10'ar ml LEB içeren tüplere aktarıldı ve 30 ºC'de 24 saat inkube edildi (ikinci zenginleştirme). Zenginleştirme yapılan sıvı besiyerinden bir öze dolusu kültür alınarak, Listeria-selective supplement ilave edilmiş Listeria Selective Agar'a (LSA, Oxford Formulation) ekildi ve sonra petri kutuları 37 ºC'de 3 gün süreyle inkubasyona bırakıldı. LSA'da üreyen Listeria şüpheli kahveremgimsi yeşil veya siyah haleli kolonilerden Tryptic Soy Agar-Yeast Extract (Difco) yüzeyine ekim yapıldı, petri kutuları 37 ºC'de 24-48 saat inkube edildi. Üreyen kolonilerden; Gram boyama, katalaz, oksidaz, İndol, Motility Medium'da (SIM) hareket ve kanlı agarda ise hemoliz testleri yapıldı. Gram pozitif, katalaz pozitif, oksidaz negatif, SIM mediumda 25 ºC'de 7 gün içerisinde şemsiye tarzında üreme gösteren ve kanlı agarda ß- hemoliz veren koloniler Listeria spp şüpheli koloniler olarak değerlendirildi. İdentifikasyonu amacıyla L-Ramnoz, ksiloz, mannitol, salisin, dulsit, metil red, Voges Proskauer, nitrat redüksiyon ve CAMP testleri yapıldı 13.